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    古朵簡述:皮質醇ELISA試劑盒常見的定量方法

    發布時間:2022-11-11瀏覽次數:55返回列表

      古朵簡述:皮質醇ELISA試劑盒常見的定量方法


      測定原理:現在皮質醇ELISA試劑盒除非是測定抗體的以外,一般使用的是雙抗體夾心法,此種方法大多數用的是增強的雙抗體夾心法,即使用生物素-親和素系統,還有少數的指標可能使用競爭法,這類方法適用于半抗原的測定。

      具有復雜結構的多表位蛋白抗原,其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗,否則背景很高。當然如果兩個都是單抗(這兩個單抗針對不同表位),那么測定的線性范圍就較寬,試劑盒性能就較好;一個用單抗,一個用多抗,測定的靈敏度會較高。

      某些簡單的化合物用皮質醇ELISA試劑盒測定時,因為沒有兩個或以上的表位,一般只能作為半抗原,只能用競爭法測定。如果你發現有測定簡單化合物(如雌激素、NO、等)用雙抗體夾心法作測定原理時,這個試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區別。

      一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形,隨著待則標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色,即所謂的“鉤狀效應”(hookeHect),也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現象”(zonephenomenon)。所以當使用一步雙抗體夾心法時,樣品濃度太高,有時會出現測不出來的現象,此時要作適當的稀釋才能準確測定。

      皮質醇ELISA試劑盒的組成:用雙抗體夾心法作為測定的方法時,試劑盒的組成一般包括:已包被單抗的酶標板:一塊,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有鋁箔袋密封,打開后有干燥劑,實驗時暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。

      皮質醇ELISA試劑盒操作步驟

      1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

      2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

      3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

      4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

      5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

      6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

      7、溫育:重復4的操作。

      8、洗板:重復5的操作。

      9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。

      10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

      11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

      12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

      古朵簡述:皮質醇ELISA試劑盒常見的定量方法古朵生物長期經營多重免疫熒光試劑與技術服務、大鼠ELISA試劑盒、人elisa試劑盒,小鼠elisa試劑盒,sigma,amresco等大品牌試劑、為客戶提供免費代測ELISA試劑盒服務,我們將全心全意服務好每一位客戶!古朵與您共創科研未來!

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